Gram Boyama Nedir, Nasıl Yapılır ve Değerlendirilir ?

Gram Boyama, farklı hücre duvarı bileşenlerine göre iki büyük bakteri grubunu ayırmak için kullanılan yaygın bir tekniktir.

Gram boyama prosedürü, bu bakterileri kırmızı veya mor renklendirerek Gram pozitif ve Gram negatif gruplar arasında ayrım yapar.

Genel Bilgiler

Gram pozitif bakteriler, hücre duvarlarında kalın bir peptidoglikan tabakasının varlığına bağlı olarak menekşe – mor ötesi leke tutmaktadır.

Gram negatif bakteriler ise kırmızı-turuncu renkte boya tutar, renk açma işlemi sırasında kristal viole’yi tutmaz.

Gram Boyama Nasıl Çalışır ?

Gram boyama’da Gram pozitif ve Gram negatif bakteriler arasındaki hücre zarındaki bir peptidoglikan tabakasının kalınlığındaki farklılıklar nedeniyle Gram pozitif bakteriler (daha kalın bir peptidoglikan tabakası ile), dekolorizasyon işlemi sırasında kristal viole boyasını muhafaza ederken, Gram negatif bakteriler kristal viole boyasını kaybeder ve son boyama işleminde sadece sulu fuksin tarafından boyanır.

 

 

Gram Boyama İşlemi Basamakları

1- Bakteri örneğini bir lama yayın. 

2- Havada kurutun.

3- Kristal Viole dökün, lamı kaplasın ve 1 dk bekletin.

Bir piset ile 5 saniye suyla yıkayın.

 

 

4- Lugol dökün, lamı kaplasın ve 1 dk bekletin (böylece kristal viole bakterilerin hücre duvarına sabitlenir).

5- Lamı alkol ile 3 saniye boyunca dekolorize edin ve piset suyu ile durulayın (gram negatif bakterilerde alkol, kristal viole’yi kaldırır. Bununla birlikte, eğer alkol örnek üzerinde çok uzun kalırsa, Gram pozitif bakterileri de dekolorize eder, dikkat edin).

6- Sulu Fuksin, lamı kaplasın ve 1 dk bekletin (bakteri gram pozitif’se sulu fuksin’le boyanmaz, gram negatif’ler boyanır).

Piset suyu ile 5 saniye durulayın.

Kurutup mikroskopta inceleyin.

 

 

Değerlendirme Nasıl Yapılır ?

Kristal Viole’yi tutan yani mor-menekşe boyanan bakteriler Gram Pozitif

Kristal Viole’yi tutmayıp Sulu Fuksin’i tutan yani kırmızımsı-turuncu boyanan bakteriler Gram Negatif‘tir.

Bakterilerin Gr (+) lik veya Gr (-) lik özellikleri bazı hallerde değişebilir. Boyama sırasında bakterilerin alkole uzun süre muamele edilmesi, bakterinin yaşı, ortamın bileşimi ve pH ‘sı bu konuda etken rol oynar.

Gram Pozitif ve Negatif Bakteri Listesi

Gram Positif Bakteriler

• S. saprophyticus
• S. bovis
• C. urealyticum
• Staph aureus
• B. cereus
• S. pneumoniae
• A. adiacens
• S. mitis group
• S. agalactiae
• S. lugdunensis
• C. jelkenium
• Lactobacillus sp.
• C.septicum
• Veillonella
• Eubacterium
• Clostridium sp.
• C. difficile
• C. perfringens
• Listeria monocytogenes
• Erysipelothrix rhusiopathiae
• Arcanobacterium bemolyticum

Gram Negatif Bakteriler

• Proteus spp.
• Escherichia coli
• Morganella
• N. gonorrhea
• Moraxella catarrhalis
• N. meningitidis
• Klebsiella pneumoniae
• Aeromonas hydrophila
• Providencia
• Enterobacter cloacae
• Cariobacter hominis
• H. influenzae
• Alkaligenes
• Burkholderia cepacia
• H. parainfluenzae
• Pasturella multocida
• Kingella kingae
• Brucella sp.
• C. jejuni
• Haemophilus aphrophilus
• Stenotrophomonas maltophilia

 

 

error: Oops. iceriklerimiz okuman icindir, kopyalaman icin degil !